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BICR 18細(xì)胞,BICR 18細(xì)胞株的污染及制止

2017-02-10 瀏覽次數(shù):1536

BICR 18細(xì)胞,BICR 18細(xì)胞株的污染及制止

產(chǎn)品名稱:BICR 18細(xì)胞

中文名稱:鱗狀細(xì)胞癌,扁平上皮癌細(xì)胞

    號:BICR 18

規(guī)    格:1~3*106細(xì)胞/25cm2培養(yǎng)瓶

 BICR 18細(xì)胞,BICR 18細(xì)胞株的污染及制止

按現(xiàn)代的觀念,凡是混入培養(yǎng)環(huán)境中對細(xì)胞生存產(chǎn)生有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物都應(yīng)該視為污染。根據(jù)這一概念,組織培養(yǎng)污染物應(yīng)包括生物(真菌、細(xì)菌、病毒和支原體)、化學(xué)物質(zhì)(影響細(xì)胞生存、非細(xì)胞所需的化學(xué)成分)、細(xì)胞(非同種的其他細(xì)胞)。其中一微生物zui為多見。另外,隨著使用細(xì)胞種類增多,不同細(xì)胞交叉污染,尤其是Hela細(xì)胞的污染也時(shí)有發(fā)生,從而造成細(xì)胞不純。
一、污染途徑 污染物,特別是微生物常通過下列途徑進(jìn)入培養(yǎng)體系,造成污染
1、空氣:空氣是微生物及塵埃顆粒傳播的主要途徑??諝饬鲃有源螅绻囵B(yǎng)操作場地于外界隔離不嚴(yán)格或消毒不充分,外界不潔空氣很容易進(jìn)入造成污染。因此,培養(yǎng)設(shè)施不能設(shè)在通風(fēng)場所。無菌操作應(yīng)在凈化臺內(nèi)進(jìn)行,工作時(shí)要帶口罩,以免因講話、咳嗽等使外界污染進(jìn)入操作面,造成污染。
2、器材:各種培養(yǎng)器皿、器械消毒不*和洗刷不干凈導(dǎo)致污染,另外需要對培養(yǎng)箱進(jìn)行定期消毒,防止形成污染
3、操作:實(shí)驗(yàn)操作無菌觀念不強(qiáng),技術(shù)不熟練,使用污染的器皿或封瓶不嚴(yán)等,都可以造成污染。培養(yǎng)兩種細(xì)胞以上時(shí),操作不規(guī)范,交叉使用吸管或培養(yǎng)液、瓶等有可能導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染。
4、血清:有些血清在生產(chǎn)時(shí)就已經(jīng)被支原體或病毒等污染,變成了污染。
5、組織樣本:原代培養(yǎng)的污染多數(shù)來源于組織樣本;取材時(shí)碘酒消毒后脫碘不*,可造成碘混入組織,細(xì)胞或培養(yǎng)液中,影響細(xì)胞細(xì)胞生長。
二、污染對培養(yǎng)細(xì)胞的影響及污染的檢測
由于體外培養(yǎng)細(xì)胞自身沒有抵抗污染的能力,而且培養(yǎng)基中的抗生素抗污染能力有限,因而培養(yǎng)細(xì)胞一旦發(fā)生污染多數(shù)將無法挽回。細(xì)胞污染早期或污染程度較輕時(shí),如果能及時(shí)去除污染物,部分細(xì)胞有可能恢復(fù)、但是當(dāng)污染物持續(xù)存在培養(yǎng)環(huán)境中,輕者細(xì)胞生長緩慢,分類象減少,細(xì)胞變得粗糙,輪廓增強(qiáng)細(xì)胞漿出現(xiàn)顆粒、污染較嚴(yán)重,細(xì)胞增值停止,分裂象消失,細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)大量堆積物,細(xì)胞變圓、脫壁。
(一)細(xì)菌污染對培養(yǎng)細(xì)胞的影響及污染物的檢測
常見的污染細(xì)菌有大腸桿菌、假單孢菌、葡萄球菌等。細(xì)菌污染初期由于培養(yǎng)體系的抗生素作用, 其繁殖處于抑制狀態(tài),細(xì)胞生長不受明顯影響,污染情況用倒置顯微鏡觀察不易判斷。懷疑培養(yǎng)細(xì)胞有細(xì)菌污染時(shí),取10ml細(xì)胞懸液離心1000轉(zhuǎn)5分鐘,沉淀中加入無抗生素培養(yǎng)液2ml,將細(xì)胞放培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
如果培養(yǎng)無真的細(xì)菌污染,24小時(shí)內(nèi)可以獲得陽性結(jié)果。當(dāng)污染的細(xì)菌量比較大或者細(xì)菌增殖到一定基數(shù)時(shí),大約每20分鐘一代,會使培養(yǎng)系統(tǒng)中很快產(chǎn)生大量細(xì)菌,后者不僅可以消耗培養(yǎng)系統(tǒng)中的養(yǎng)分,還能釋放大量代謝產(chǎn)物。幾個(gè)小時(shí)后,增殖的細(xì)菌就可以導(dǎo)致培養(yǎng)液外觀渾濁,肉眼就可以判斷。細(xì)菌污染大多數(shù)可以改變培養(yǎng)液pH,使培養(yǎng)液變渾濁、變色。用相差顯微鏡觀察,可見滿視野都是點(diǎn)狀的細(xì)菌顆粒,原來的清晰培養(yǎng)背景變得模糊,大量的細(xì)菌甚至可以覆蓋細(xì)胞,對細(xì)胞的生存構(gòu)成威脅。用青霉素、鏈霉素可以預(yù)防細(xì)菌污染有效。
(二)真菌污染對細(xì)胞的影響及污染物的檢測
微生物污染中以真菌zui多,真菌種類繁多,形態(tài)各異,但是污染后易于發(fā)現(xiàn),大多呈白色或淺黃色小點(diǎn)漂浮于培養(yǎng)液表面,肉眼可見;有的散在生長,鏡下可見呈絲狀、管狀、樹枝狀,縱橫交錯(cuò)穿行于細(xì)胞之間。念珠菌和酵母菌卵圓形,散在細(xì)胞周邊和細(xì)胞之間生長。真菌生長迅速,能在短時(shí)間內(nèi)抑制細(xì)胞生長、產(chǎn)生有毒物質(zhì)殺死細(xì)胞。抗真菌制劑對預(yù)防和排除真菌污染有效。
(三)支原體污染對細(xì)胞影響及污染物的檢測
細(xì)胞培養(yǎng)(特別是傳代細(xì)胞)被支原體污染是個(gè)世界性問題,是細(xì)胞培養(yǎng)zui常見的、干擾試驗(yàn)結(jié)果的一種污染。但由于不易被察覺,有些污染的細(xì)胞仍在被應(yīng)用。研究表明,95%以上是以下四種:口腔支原體(M.orale)、精氨酸支原體(M.arginini)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)和萊氏無膽甾原體(A.laidlawii),為牛源性。以上是zui常見的污染細(xì)胞培養(yǎng)的支原體菌群,但能夠污染細(xì)胞的支原體種類是很多的,國外調(diào)查證明,大約有二十多種支原體能污染細(xì)胞,有的細(xì)胞株可以同時(shí)污染兩種以上的支原體。據(jù)查,目前各實(shí)驗(yàn)室使用的二倍體細(xì)胞和傳代細(xì)胞中約有11%的細(xì)胞受到支原體污染。
污染來源包括工作環(huán)境污染、操作者本身污染(一些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)基污染、污染支原體的細(xì)胞造成的交叉污染、實(shí)驗(yàn)器材帶來的污染和用來制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染。支原體污染后,因?yàn)樗鼈儾粫辜?xì)胞死亡可以與細(xì)胞長期共存,培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁,細(xì)胞無明顯變化,外觀上給人以正常感覺,實(shí)則細(xì)胞手到多方面潛在影響,如引起細(xì)胞變形,影響DNA合成,抑制細(xì)胞生長等。
細(xì)胞培養(yǎng)中,主要從以下幾個(gè)方面來預(yù)防支原體的污染:控制環(huán)境污染;嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作;細(xì)胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌;在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。
支原體污染細(xì)胞后,特別是重要的細(xì)胞株,有必要清除支原體,常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補(bǔ)體聯(lián)合處理。支原體zui突出的結(jié)構(gòu)特征是沒有細(xì)胞壁,一般來講,對作用于細(xì)胞壁生物合成的抗生素,如 -內(nèi)酰胺類、萬古霉素等*不敏感;對多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體zui有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類及一些氟喹諾酮;其他類抗生素如氨基糖苷類、氯霉素對支原體有較小抑制作用,所以常不用來作為支原體感染的化學(xué)治療劑。
(四)細(xì)胞交叉污染對細(xì)胞的影響及污染物的檢測
細(xì)胞培養(yǎng)中,細(xì)胞間交叉污染并不罕見,多是由于在培養(yǎng)中操作時(shí)各種細(xì)胞同時(shí)進(jìn)行,混雜使用器皿和液體所致,這種污染能使細(xì)胞的生長特性、形態(tài)特征等發(fā)生變化,有些變化較輕、不易察覺,有些可能由于污染的細(xì)胞具有生長優(yōu)勢zui終壓過原來細(xì)胞而導(dǎo)致細(xì)胞的生長抑制,zui終死亡。常用觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)、分析生長特性和核型、檢測細(xì)胞的標(biāo)記物等方法檢測交叉污染的細(xì)胞。

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